Biohazard 5 được thực hiện dưới chỉ đạo của Takeuchi Jun người từng đạo diễn Onimusha và Lost Planet Extreme Condition còn Anpo Yasuhiro người từng nhận nhiệm vụ quảng bá cho Biohazard 2 cũng như đầu tư cho Biohazard 4 đã nhận nhiệm vụ giám sát dự án, một số nhân viên tham gia phát triển các tựa Biohazard trước cũng tham gia phát triển trò chơi nhưng hầu hết thì đang bận tham gia phát triển Biohazard Umbrella Chronicles. Việc phát triển trò chơi được thực hiện trong khoảng 3 năm với 110 nhân viên đã làm việc trong dự án này lúc cao điểm. Takeuchi nói rằng rất nhiều phim với nhiều cảnh đã truyền cảm hứng cho nhóm trong việc thực hiện trò chơi còn Lost Planet đã cho ông kinh nghiệm phát triển sản phẩm trên nhiều hệ máy.

Trong cuộc phỏng vấn với 1Up, đạo diễn Anpo Yasuhiro đã trả lời rằng nhóm đã lên kế hoạch chủ động làm cho trò "hơi ngắn" so với Biohazard 4 vì thấy Biohazard 4 khá dài nhưng không gây hưng phấn nhiều nên đã chọn phát triển con đường ngắn nhưng vô cùng phấn khích và nhiều hành động hơn. Các tựa trước đó trong dòng trò chơi này diễn ra về đêm nhưng nhóm đã quyết định chọn thử thách mới là chuyển nó lên ban ngày để xem thử có còn kinh dị được không cũng như công nghệ đồ hoạ mới đã cho phép làm như thế. Trò chơi sử dụng kỹ thuật motion capture để làm cho các cử động trông thực tế, cách điệu hay đơn giản là sống động hơn, nhưng với các cử động không thể thực hiện trong thực tế như việc nhảy từ toà nhà này sang toà nhà khác thì các cử động này phải được thực hiện bằng tay.